HPLC là chữ viết tắt 4 vần âm đầu bởi tiếng Anh của phương thức dung nhan ký lỏng hiệu năng cao (High Performance Liquid Chromatography), trước đó Gọi là phương pháp dung nhan ký lỏng cao thế (High Pressure Liquid Chromatography).

Bạn đang xem: Hplc là gì


1.Khái niệmPhương pháp sắc đẹp cam kết lỏng tính năng cao (HPLC) thành lập năm 1967-1968 bên trên cửa hàng cải tiến và phát triển với cách tân từ phương thức dung nhan ký kết cột cổ xưa. HPLC là 1 trong phương thức chia bóc tách trong những số đó trộn cồn là hóa học lỏng cùng pha tĩnh cất vào cột là hóa học rắn đã được phân loại dưới dạng đái phân hoặc một hóa học lỏng khóa lên một hóa học có rắn, hay 1 hóa học mang đã có được trở nên bằng links hóa học cùng với các đội chức cơ học. Phương pháp này ngày càng được sử dụng rộng thoải mái và phổ cập do các lý do: gồm độ tinh tế cao, kỹ năng định lượng tốt, thích hợp tách bóc những vừa lòng hóa học nặng nề cất cánh hơi hoặc dễ phân hủy nhiệt độ.Phạm vi vận dụng của phương thức HPLC rất lớn, nhỏng so với các hợp chất thuốc trừ sâu, thuốc phòng sinc, các hóa học phụ gia thực phđộ ẩm vào nghành thực phẩm, dược phđộ ẩm, môi trường…2.Phân loạiDựa vào sự không giống nhau về chính sách tách bóc tách áp dụng vào HPLC, fan ta chia HPLC thành 4 loại:

Sắc cam kết tiêu thụ xuất xắc sắc đẹp ký lỏng rắn (adsorption/liquid chromatography). Sắc cam kết phân bố (partition chromatography). Sắc ký kết ion (ion chromatography). Sắc ký rây phân tử (form size exclusion/gel permeation chromatography).

Trong đó, nhan sắc ký kết phân bổ (SKPB) được vận dụng nhiều tốt nhất vì hoàn toàn có thể đối chiếu được rất nhiều hợp chất từ bỏ ko phân cực đến những đúng theo hóa học cực kỳ phân cực, đúng theo chất ion tất cả cân nặng phân tử không thực sự bự (SKPB được chia thành nhị loại dựa trên độ phân rất kha khá giữa pha tĩnh cùng trộn động: nhan sắc cam kết pha hay – SKPT (normal phase chromatography) với dung nhan ký kết trộn đảo – SKPĐ (reversed phase chromatography).Trong SKPT, trộn tĩnh sử dụng bao gồm độ phân rất cao hơn pha rượu cồn. Pha tĩnh các loại này sẽ sở hữu ái lực với những phù hợp chất phân cực. SKPT dùng làm bóc tách và đối chiếu các phù hợp hóa học gồm độ phân cực cao cùng với phân tử lượng khiêm tốn lắm.SKPĐ là thuật ngữ nhằm có một loại dung nhan ký kết trong số ấy pha tĩnh ít phân cực hơn trộn cồn. Phương thơm pháp này dùng so sánh những đúng theo chất từ bỏ không phân rất cho phân rất. Hầu không còn những thích hợp hóa học cơ học có mạch carbon dài (không nhiều phân cực) cực kỳ tương thích mang đến so sánh bởi SKPĐ. Dung môi áp dụng trong SKPĐ là những dung môi phân rất, trong số ấy dung môi nước nhập vai trò đặc biệt và lại rẻ chi phí. Do đó, SKPĐ được ứng dụng các và thông dụng rộng SKPT.3. Pha tĩnh vào sắc ký pha đảo Trong nhan sắc ký kết phân bố nói phổ biến, pha tĩnh là phần đông hợp chất cơ học được thêm lên hóa học có rắn silica hoặc cấu thành tự silica theo nhị kiểu:

Pha tĩnh được lưu lại trên chất mang rắn bởi lý lẽ hấp phụ thứ lý → nhan sắc ký lỏng-lỏng (liquid-liquid chromatography). Pha tĩnh link chất hóa học với chất nền → nhan sắc ký kết trộn liên kết (bonded phase chromatography)Trong quy trình sử dụng, fan ta nhận thấy nhan sắc ký pha liên kết có tương đối nhiều ưu thế rộng nhan sắc cam kết trộn lỏng-lỏng do một số nguyên nhân sau: Pha tĩnh trong hệ nhan sắc ký kết lỏng-lỏng dễ dẫn đến hòa hợp vì trộn rượu cồn phải dễ dẫn đến mất đuối trộn tĩnh trong thời gian áp dụng và gây lây lan so với vừa lòng hóa học phân tích. Do trộn tĩnh của sắc đẹp ký lỏng-lỏng dễ rã trong pha rượu cồn đề nghị người ta quan yếu áp dụng phương pháp cọ giải gradient dung môi.

Vì vậy, bạn ta thường chỉ quyên tâm mang lại nhiều loại nhan sắc cam kết phân bổ trộn liên kết cùng phần lớn các các loại cột thực hiện hiện giờ trong sắc ký kết phân bổ đều phải sở hữu kết cấu dạng này.Bề khía cạnh những hạt silica – SiO2 (các hạt này có đường kính 3, 5 hoặc 10 µm) được xử lý (tdiệt phân) bằng cách làm cho nóng với HCl 0,1M vào một hoặc nhị ngày để tạo ra phần đông team SiOH nlỗi sau (thông thường chỉ có tầm khoảng 8 µmol SiOH/m2 bề mặt):


*

Sau đó bề mặt silica đã thủy phân này sẽ tiến hành đến bội phản ứng cùng với những organochlorosilan để tạo thành các pha tĩnh ko phân cực, phân cực trung bình hoặc siêu phân rất tùy thuộc vào đội R đã nhập vào.


*

Thường chỉ tầm 50% nhóm –OH mất H+ nhằm tạo ra HCl (tức Hợp chất cần đối chiếu Lúc trải qua trộn tĩnh sẽ ảnh hưởng lưu lại do những lực lượng liên hệ khác biệt tùy ở trong đặc thù, Đặc điểm của hóa học chảy cùng trộn tĩnh.Trong SKPĐ, team cầm R trong hợp hóa học siloxan số đông ko phân cực hoặc không nhiều phân cực. Đó là những ankyl dây dài như C8 (n-octyl), C18 (n-octadecyl) có cách gọi khác là ODS (octadecylsilan) hoặc các team alkyl ngắn thêm hơn hoàn toàn như C2; mà còn còn có cyclohexyl, phenyl trong những số đó đội phenyl bao gồm độ phân cực cao hơn nữa team alkyl. Người ta phân biệt những alkyl dây tương đối dài mang lại tác dụng bóc bình ổn hơn những nhiều loại không giống phải đó là loại được thực hiện nhiều tốt nhất.


*

Tuy nhiên do cảm giác lập thể buộc phải trong kết cấu của trộn tĩnh còn nhóm –OH chưa phản ứng, tạo tác động xấu đến quá trình bóc tách sắc đẹp ký tùy môi trường xung quanh pH so với.Trong môi trường xung quanh thừa acid (pH Trong môi trường xung quanh baz (pH > 7), chủ yếu nền silic mang pha tĩnh hoàn toàn có thể bị tổ hợp (SiO2 thành silicat), hệ trái là N sút và số nhánh ghxay cũng sút, mũi rộng lớn ra với thời gian giữ cũng hoàn toàn có thể giảm. Kết trái so với điều này sẽ mất đi độ chính xác.Một trong những cách khắc phục và hạn chế hiện tượng này là cần sử dụng các hóa học như trimethylchlorosilan ClSi(CH3)3 hoặc hexamethyldisilazan (không nhiều sử dụng hơn) nhằm địa chỉ cùng với nhóm –OH này (gọi là hiện tượng kỳ lạ end-capping). Hiện nay ta sẽ sở hữu được nhiều loại cột không nhiều địa chỉ cùng với chất đối chiếu gồm tính baz (cột LC-DB của hãng sản xuất SUPELCO).


*

Có một cách không giống để thải trừ giảm ảnh hưởng của group –OH cơ mà không yêu cầu can hệ với nó là rứa rất nhiều nhóm methyl của –Si(CH3)2-C18 bởi phần nhiều team núm bự hơn như là isopropyl nhằm đa số team này vẫn bít đi đều nhóm –OH, cản ngăn xúc tiến của group –OH cùng với hóa học buộc phải đối chiếu.

Xem thêm: Download Download Total War Shogun 2 Vn Zoom, Total War: Shogun 2 (Việt Hóa) Full


*

Người ta còn ghnghiền lên dây C18 một trong những nhóm phân rất để tăng thêm độ phân rất của dây C18, có tác dụng cột có chức năng tách bóc chọn lọc rộng so với hồ hết hợp chất phân cực mạnh (cột EPS – Expended Polar Selectivity).Ngoài sườn silica, thời hạn cách đây không lâu người ta bao gồm sử dụng mang đến nền vật liệu bằng nhựa polystyren (Polystyren Reversed Phase – PRP) chất nhận được so với trong môi trường pH từ một – 13. Cột này dễ áp dụng vào môi trường xung quanh acid cùng baz táo tợn. 4. Pha hễ trong sắc ký pha đảo Pha động trong sắc cam kết lỏng nói thông thường bắt buộc đạt phần đa hưởng thụ sau: Hòa chảy chủng loại phân tích. Phù phù hợp với đầu dò. Không hài hòa tuyệt làm cho mòn trộn tĩnh. Có độ nhớt phải chăng để tách áp suất dội lại cao. Tinc khiết sử dụng cho sắc ký (HPLC grade).

Trong sắc ký pha đảo, dung môi pha động tất cả độ phân rất cao. Trên kim chỉ nan chúng ta có thể sử dụng khá nhiều dung môi tuy thế tay nghề thực tiễn cho thấy thêm methanol (MeOH), acetonitrile (ACN) cùng tetrahydrofuran (THF) là đạt được yêu cầu nhất. Nước là một dung môi được bỏ vào các dung môi cơ học để sút kỹ năng rửa giải.Mỗi dung môi phần đa đặc trưng vị các hằng số vật dụng lý nlỗi chỉ số khúc xạ (refractive sầu index), độ nhớt (viscocity), nhiệt độ sôi (boiling point), độ phân cực (polarity index), độ rửa giải (eluent strength)…Trong số đó độ phân cực với độ rửa giải tất cả tác động ảnh hưởng lớn lên kỹ năng phân tách bóc của những mũi sắc đẹp ký kết.


Có tía thông số gây ảnh hưởng mập đến tách bóc các mũi sắc ký: số đĩa lý thuyết N, hệ số dung tích K’, độ chọn lọc α . Khi sự thay đổi nhân tố trộn hễ ko đem lại kết quả bóc tách mũi theo thử dùng thì bọn họ đề xuất biến đổi bản chất trộn hễ (sử dụng dung môi khác), tức thay đổi α. thường thì rất có thể đề nghị biến hóa cả pha tĩnh.Trong quá trình tách bóc của SKPĐ, sự ảnh hưởng giữa phù hợp chất nên phân tích với trộn đụng nhờ vào tương đối nhiều vào moment lưỡng cực, tính acid (đến proton) hoặc tính baz (thừa nhận proton) của dung môi.Thông thường trộn động vào SKPĐ gồm một tất cả hổn hợp nước hoặc hỗn hợp đệm với cùng một hoặc những dung môi cơ học phân cực chảy được nội địa. Nước là 1 trong những dung môi khôn cùng phân cực nên nó không liên hệ với các đội alkyl ko phân cực vào trộn tĩnh, do đó nó được xem như trộn cồn yếu đuối tốt nhất và bao gồm vận tốc cọ giải chậm nhất trong tất cả các dung môi hễ của SKPĐ.Hỗn vừa lòng nước cùng dung môi hữu cơ thường xuyên làm tăng thêm độ nhớt dẫn tới sự việc tăng áp suất cột.


Việc tuyển lựa dung môi cùng yếu tố dung môi vào trộn động được về tối ưu hóa mang đến đông đảo hợp chất nên phân tích. Đôi khi, fan ta sử dụng các thành phần hỗn hợp dung môi MeOH/nước trước, rồi ACN/nước xuất xắc THF/nước. Với một hỗn hợp chất đối chiếu phức tạp thì sẽ có được sự xáo trộn của các dung môi cơ học với nước. lúc chắt lọc thì cần chọn những hỗn hợp MeOH, Acông nhân và THF với nước tất cả độ rửa giải tương đồng.Thành phần pha đụng hoàn toàn có thể thắt chặt và cố định nhìn trong suốt quy trình chạy sắc ký (chế độ isocratic) hoặc được biến hóa theo một công tác đã định sẵn (lịch trình gradien dung môi) để có hiệu quả bóc tốt hơn.5. Một số đại lượng cơ bản trong đối chiếu sắc ký5.1. Hệ số phân bốCân bằng của một cấu tử X vào hệ dung nhan ký kết hoàn toàn có thể được diễn đạt bởi phương trình nhỏng sau:

Hằng số cân bằng K cho cân bằng này được hotline là tỉ trọng phân bổ hay hằng số phân bố (partition coefficient) và được tính nhỏng sau:


Với CS : độ đậm đặc cấu tử vào pha tĩnh.CM : mật độ cấu tử trong trộn cồn.Hệ số K tùy trực thuộc vào bản chất trộn tĩnh, trộn động với hóa học so sánh.5.2. Thời gian lưu:tR : thời gian lưu của một cấu tử từ bỏ lúc vào cột cho đến lúc tách bóc ra ngồi cột.tO : thời gian để cho chất nào đó không tồn tại ái lực với trộn tĩnh trải qua cột; này cũng là thời hạn trộn động đi từ đầu cột đến cuối cột với có cách gọi khác là thời hạn lưu chết.tR" : thời hạn lưu lại thiệt của một cấu tử.

Với VS :thể tích trộn tĩnhVM :thể tích pha độngNếu k’~ 0, tR~ tO: hóa học ra khôn cùng nkhô cứng, cột ko có tác dụng giữ lại hóa học lại.Nếu k’ càng phệ (tR càng lớn): hóa học sinh sống vào cột càng lâu, thời gian đối chiếu càng lâu, mũi có công dụng bị tù túng.Khoảng k’ lphát minh là 2-5, dẫu vậy Khi đối chiếu một các thành phần hỗn hợp tinh vi, k’ rất có thể chấp nhận trong vòng rộng lớn 1-trăng tròn.

Xem thêm: 25 Hình Xăm Veni Vidi Vici Là Gì, Veni Vidi Vici Là Gì

5.4. Hiệu năngHiệu năng hay số đĩa lý thuyết N của cột đặc thù đến kỹ năng bóc tách mũi sắc ký kết của những cấu tử trên cột. N càng mập, tính năng bóc tách càng tốt. Số đĩa kim chỉ nan có thể đo bên trên sắc đẹp ký vật dụng. Người ta chứng minh được:


Với Wmột nửa là chiều rộng lớn mũi nhan sắc ký tại đoạn ½ chiều cao mũi (phút)W là chiều rộng lớn mũi dung nhan cam kết ở đoạn đáy mũi (phút)5.5. Độ lựa chọn lọckhông giống nhau mang lại năng lực tách bóc hai hóa học của cột.


5.6. Độ phân giải:Đây là đại lượng thể hiện rõ cả tía khả năng của cột sắc đẹp ký: sự giải hấp, sự tinh lọc với hiệu quả tách. Nó được khẳng định qua pmùi hương trình sau:

Bài viết liên quan

Trả lời

Email của bạn sẽ không được hiển thị công khai. Các trường bắt buộc được đánh dấu *